分離提取自鱟血的鱟試劑（Limulus Amebocyte Lysate，美洲鱟試劑，簡(jiǎn)稱(chēng)LAL），是一種歷史悠久、使用廣泛的細菌內毒素檢測試劑，被各國藥典所認可。Lonza品牌的內毒素檢測用鱟試劑產(chǎn)品，已有近40年的研發(fā)應用歷史，并獲得了美國FDA認證（License No.1775）。

目前，北京澤平代理的LONZA品牌提供多種檢測方法的鱟試劑產(chǎn)品，包括美洲鱟試劑（LAL）、不依賴(lài)于鱟血的重組C因子試劑，以及配套使用的酶標儀、熒光檢測儀，提供符合FDA Part 11的內毒素檢測專(zhuān)用軟件等，可實(shí)現0.005-100EU/mL范圍的內毒素定性、定量檢測。


一、動(dòng)態(tài)顯色法鱟試劑

Lonza動(dòng)態(tài)顯色法鱟試劑（Kinetic-QCL Kinetic Chromogenic LAL Assay，簡(jiǎn)稱(chēng)KQCL），是一種動(dòng)態(tài)、定量檢測內毒素的試劑盒。在內毒素的存在下，動(dòng)態(tài)顯色法鱟試劑將無(wú)色的發(fā)光短肽底物中的顯色基團PNA切下，使溶液呈現，顏色變化的時(shí)間和內毒素含量呈負相關(guān)，通過(guò)檢測分光光度計405nm下的光密度OD值變化，繪制內毒素濃度標準曲線(xiàn)，即可計算出未知樣本中的內毒素含量。

Lonza動(dòng)態(tài)顯色法鱟試劑，是Lonza最靈敏的內毒素檢測試劑，無(wú)需形成凝膠，相比凝膠法、濁度法，受到的抑制反應更少，抗干擾能力最強，檢測范圍廣（405nm處吸光的深樣品不可用），其0.005-50EU/mL的靈敏度，非常適合生物制品如疫苗、抗生素等檢測。

使用時(shí)，將混合有鱟試劑和底物的凍干粉復溶，放入96孔板中，加入待測樣品，在405nm吸光度檢測顏色變化，動(dòng)態(tài)監控其顯色反應時(shí)長(cháng)，反應時(shí)間約1小時(shí)后（根據內毒素限值而定），計算樣品內毒素含量。
 


 
 
二、動(dòng)態(tài)濁度法鱟試劑

Lonza動(dòng)態(tài)濁度法鱟試劑（PYROGENT-5000 Kinetic Turbidimetric LAL Assay），是一種動(dòng)態(tài)、定量檢測內毒素的試劑盒。內毒素存在下，動(dòng)態(tài)濁度法鱟試劑形成凝膠，使溶液變渾濁，濁度變化的時(shí)間與內毒素含量成反比，通過(guò)檢測吸光度變化時(shí)間，建立內毒素標準曲線(xiàn)，可以計算出未知樣品中的內毒素含量。

Lonza動(dòng)態(tài)顯色法鱟試劑，靈敏度0.01-100EU/mL，檢測范圍大，可以檢測有色樣品，按照美國FDA相關(guān)許可生產(chǎn)，當檢測水和大容量液體時(shí)更具性?xún)r(jià)比。

使用時(shí)，將鱟試劑和緩沖液混合，置于中37℃孵育，添加樣品混勻后，動(dòng)態(tài)檢測濁度變化，反應時(shí)間約1小時(shí)后（根據內毒素限值而定），計算樣品內毒素含量。



 

三、重組C因子熒光檢測試劑盒

Lonza PyroGene重組C因子內毒素檢測試劑盒（PyroGene Recombinant Factor C Endpoint Fluorescent Assay），是一種終點(diǎn)法、定量檢測內毒素的試劑。其不含鱟血成分，是LAL鱟試劑的可持續替代方案。C因子是鱟試劑酶促反應中的第一個(gè)組成部分，重組生產(chǎn)的C因子（rFC），在內毒素存在下被激活，不激活LAL級聯(lián)反應中的其他酶，而是直接裂解熒光底物，釋放熒光，建立內毒素標準曲線(xiàn)，可計算樣品的內毒素含量。

Lonza重組C因子熒光檢測試劑盒，采用終點(diǎn)分析法，高通量分析更簡(jiǎn)單，熒光信號范圍廣，只需一步反應，靈敏度0.005-5EU/mL，消除了葡聚糖的假陽(yáng)性，具有更高的內毒素特異性，非動(dòng)物源成分，批次間差異小，重復性高。繼歐洲藥典（EP）、日本藥典(JP)、美國藥典(USP)之后，第4版本的中國藥典將重組C因子法列為細菌內毒素檢測方法，并在2020年生效。

使用時(shí)，Lonza重組C因子試劑為液態(tài)，可按需取用不會(huì )浪費試劑，在96孔板中與待測樣品混合，孵育1小時(shí)，使用380/440nm的激發(fā)/發(fā)射波長(cháng)，計算樣品內毒素含量。



 

四、終點(diǎn)顯色法鱟試劑

Lonza終點(diǎn)顯色法鱟試劑(QCL-1000 Endpoint Chromogenic LAL Assay)，是一種終點(diǎn)法、定量檢測內毒素的試劑，是Lonza鱟試劑中最快速的檢測方法。在內毒素存在下，終點(diǎn)顯色法鱟試劑分解底物，使溶液變?yōu)�，測定405-410nm下的OD值，建立標準曲線(xiàn)，可計算樣品內毒素含量。

Lonza終點(diǎn)顯色法鱟試劑，16分鐘快速檢測，僅需一個(gè)多道移液器、一個(gè)干熱裝置和一個(gè)96孔板。將樣品加入96孔板，37℃孵育10分鐘，添加顯色底物，37℃孵育6分鐘，添加終止緩沖液，測定405-410nm OD值。
 




五、凝膠法鱟試劑

Lonza凝膠法鱟試劑(PYROGENT  Gel Clot LAL Assay)，是一種內毒素的限量檢測方法。將鱟試劑和樣品置于37℃水浴或金屬浴中的試管中，孵育1小時(shí)，將試管翻轉180°，如凝塊牢固地附著(zhù)在試管底部，表明內毒素為陽(yáng)性。如凝塊向下流動(dòng)，則內毒素為陰性。

Lonza凝膠法鱟試劑提供0.03、0.06、0.125、0.25EU/mL的靈敏度，定量結果通過(guò)肉眼觀(guān)察凝膠形成，不需要復雜的儀器和軟件，簡(jiǎn)便易讀，成本低。但實(shí)驗結果容易受到振動(dòng)、溫度等干擾。

與其它酶促反應一樣，凝膠法測定依賴(lài)于pH值。Lonza PYROGENT凝膠法鱟試劑包含的緩沖液，使測試前不需要調整樣品pH值。



 

六、內毒素檢測儀器和軟件

1、WinKQCL內毒素檢測軟件

Lonza專(zhuān)為內毒素檢測設計的WinKQCL軟件，符合美國FDA 21 CFR Part 11對電子記錄和簽名、審計跟蹤和數據庫歸檔的技術(shù)要求，企業(yè)級的數據庫存儲模式，保障了數據完整性、真實(shí)性、安全性。趨勢分析功能，預判各批次內毒素含量超標情況，讓結果分析以及查找更高效。九種語(yǔ)言模式，中英界面快捷切換。能結合LIMS、LIS、MODA等實(shí)驗室信息管理系統，并可以在Citrix系統上操作。



支持大量常規酶標儀：

①光吸收酶標儀
BioTek ELx808
BioTek Eon
Molecular Devices SpectraMax 340PC,340PC384, Plus384 and 190PC
Molecular Devices VersaMax
Tecan Sunrise

②熒光酶標儀
Lonza PyroWave
BioTek FLx800
Molecular Devices Gemini EM, Gemini XPS and Gemini XS

③多功能酶標儀（光吸收和熒光酶標儀）
BioTek Synergy 2
Molecular Devices SpectraMax M2, M2e, M3,M4, M5 and M5e
Molecular Devices FlexStation
 

2、ELx808酶標儀

專(zhuān)業(yè)用于Lonza Kinetic-QCL動(dòng)態(tài)顯色法鱟試劑、PYROGENT-5000動(dòng)態(tài)濁度法鱟試劑的酶標儀，并可作為標準分光光度計，用于QCL-1000終點(diǎn)顯色法鱟試劑檢測。96孔板全自動(dòng)讀取，可存儲多達55個(gè)試劑盒、測試結果、標準曲線(xiàn)。優(yōu)秀的溫度均勻性，高精確性，根據鱟試劑優(yōu)化配置，已作為L(cháng)onza內毒素檢測系統的一部分進(jìn)行了驗證，可無(wú)縫對接WinKQCL軟件，用于內毒素檢測的供應商QC放行檢測。




3、PyroWave XM 熒光酶標儀

專(zhuān)業(yè)用于Lonza PyroGene重組C因子熒光檢測試劑盒，并可作為光度計，可無(wú)縫對接WinKQCL軟件。具有優(yōu)秀的溫度均勻性，簡(jiǎn)單易用，根據重組C因子優(yōu)化配置，用于內毒素檢測的供應商QC放行檢測。



 
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——Lonza中國一級代理商，北京澤平