Axion CytoSMART Lux3箱內全自動(dòng)活細胞成像系統（原Lonza CytoSMART活細胞成像儀），為荷蘭進(jìn)口細胞成像儀，體積小巧，可方便地用于二氧化碳培養箱內，在明場(chǎng)、熒光通道下對細胞培養進(jìn)行監測，并通過(guò)拍攝高品質(zhì)細胞圖像、延時(shí)攝影、快速可靠的數據處理軟件，實(shí)現對樣本形態(tài)及行為變化的實(shí)時(shí)可視化分析。



 

CytoSMART Lux3細胞成像儀優(yōu)勢

1、體積小巧

所有硬件和電子器件都能在5~40°C及20~95%的濕度環(huán)境下運行。更小尺寸，重量1.3kg，箱內移動(dòng)無(wú)壓力，空間占用少。

2、操作簡(jiǎn)單

step-by-step引導式實(shí)驗流程設定，點(diǎn)擊即自動(dòng)呈現數據、圖片或影像，照片上傳國內云端服務(wù)器，進(jìn)行圖像數據分析。即插即用，無(wú)需安裝調試，無(wú)易損模塊，無(wú)需維護。

3、高品質(zhì)圖片

LED光源位于樣本上方，數據采集由樣本臺下方的可變焦鏡頭完成，640萬(wàn)像素CMOS成像，10倍鏡下0.7μm/像素的超高分辨率，只使用CMOS 67%的核心區域成像，避免畸變困擾。

4、方便拓展

可多臺并聯(lián)，提升實(shí)驗通量和平臺共享能力。一拖四，單臺終端即能實(shí)現實(shí)驗室集約管理。

5、兼容各類(lèi)細胞培養容器

可使用任何高度小于55mm（樣本臺到光源下沿的距離）的透明培養容器，如6~384孔多孔培養板、培養皿、T25~T225培養瓶等。

 

 

CytoSMART Lux3細胞成像儀應用

支持明場(chǎng)、以及紅色和綠色熒光雙通道細胞計數，可對樣本中被熒光標記細胞的數量和大小進(jìn)行定量計算，并開(kāi)展長(cháng)期追蹤。

1、轉染與轉導

CytoSMART Lux3優(yōu)秀的成像能力和機器學(xué)習算法，可對熒光報告基因載體的表達進(jìn)行直接觀(guān)測和定量測定。
 


實(shí)驗樣本為HepG2細胞，使用了BacMam表達系統進(jìn)行轉導。通過(guò)圖像數據自動(dòng)分析，軟件給出了細胞覆蓋度和熒光標記計數的實(shí)時(shí)結果。藍色對應整體樣本，綠色和紅色對應其中表達了BacMam-Actin-GFP及/或BacMam-Nucleus-RFP的那部分細胞�？梢钥吹綇霓D染后第7小時(shí)開(kāi)始，紅色和綠色熒光蛋白的表達一直呈現迅速升高的趨勢，且過(guò)夜以后仍然未見(jiàn)衰退，雖然此時(shí)細胞的增殖已經(jīng)進(jìn)入平臺期。而且轉導表達會(huì )先發(fā)生在細胞骨架中，那里表達的蛋白量也高于細胞核。這些數據結合影像，提供了綜合性的轉導質(zhì)控依據。
 



 

2、細胞匯合變化 

支持在2D培養體系中計算被細胞覆蓋的表面占比，提供高效、保真的細胞匯合度分析�；�于圖像的自動(dòng)捕獲及計算，自動(dòng)生成報告展示細胞覆蓋度（%，成像范圍內總的細胞覆蓋度，當使用熒光成像時(shí)，分別給出紅色及綠色熒光的覆蓋度）、匯合比例（%，發(fā)出綠色及紅色熒光物體各自的覆蓋度）數據。應用于在無(wú)標記或熒光標記實(shí)驗中計算細胞匯合度、確定合適的細胞傳代時(shí)間點(diǎn)以維持細胞表型及培養質(zhì)量、藥物處理后細胞匯合度及活力評估、設定提醒內容告知何時(shí)完成細胞傳代等。CytoSMART Lux3自動(dòng)對細胞活力和增殖過(guò)程進(jìn)行追蹤并給出定量分析，提高實(shí)驗的效率和可重復性。
 


 

3、劃痕/遷移跟蹤

支持觀(guān)察劃痕實(shí)驗，可在實(shí)驗全程中無(wú)標記地檢測細胞的遷移，實(shí)時(shí)觀(guān)察并定量檢測傷口閉合或者是細胞侵襲的過(guò)程，以評估藥物處理及條件改變對于遷移過(guò)程中細胞的影響等。系統可自動(dòng)選定無(wú)細胞區域（即劃痕），并定量計算該缺口閉合及細胞遷移的速度，提供劃痕面積（μm2，變化中的劃痕面積）、速度（μm2/s，細胞遷移速度）等數據。
 


 

4、細胞凋亡

結合特定凋亡通路的熒光標記，Lux3可以在監控樣本動(dòng)態(tài)變化的過(guò)程中，提示凋亡事件發(fā)生的時(shí)間順序或通路依賴(lài)性。
 


綠色熒光染料pSIVA-IANBD能結合外翻的細胞膜中磷脂酰絲氨酸（PS），從而提示早期的凋亡發(fā)生；而PI則是常用的細胞核紅色熒光染料，它能指示凋亡過(guò)程的終結。在兩組CHOK-1細胞樣本中加入上述兩種熒光染料后，并聯(lián)使用兩臺Lux3，進(jìn)行了間隔為10分鐘的連續攝像并一直持續到第24小時(shí)。圖中的上層為空白對照組的延時(shí)成像結果，下層為同時(shí)間點(diǎn)經(jīng)0.6mM H2O2處理發(fā)生了細胞凋亡的實(shí)驗組的成像結果。通過(guò)對熒光區域的定量識別，CytoSMART云端計算能分析得到并自動(dòng)生成兩個(gè)樣本各自的凋亡指數曲線(xiàn)，為凋亡研究提供重要的判斷依據。
 


5、單細胞示蹤

在ibidi μ-Slide channel板中觀(guān)察細胞對FBS的濃度變化是否做出趨向性運動(dòng)。HeLa細胞上樣時(shí)培養基中FBS的濃度為10%。在相鄰的兩個(gè)Channel中則分別添加20%和0% FBS濃度的同種培養基，在這樣的FBS濃度梯度環(huán)境中，細胞是可以移動(dòng)的。另設一塊趨化板作為對照組，其中不同部位的FBS濃度均為10%。該實(shí)驗并聯(lián)使用了兩臺Lux 3，以每5分鐘拍攝一次的頻率連續采樣24小時(shí)。隨后以圖片為原始數據，使用CytoSMART單細胞識別功能及第三方軟件的追蹤功能，來(lái)對每個(gè)細胞的運動(dòng)軌跡進(jìn)行統計學(xué)分析。結果發(fā)現，HeLa細胞在FBS濃度恒定的環(huán)境中會(huì )在更大范圍內做均勻分散；而在具有FBS濃度差的環(huán)境中，其運動(dòng)范圍則更為集中，而且存在向更高濃度區域運動(dòng)的傾向。
 

 

 

參考文獻

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